@phdthesis{Stoll2017,
  author    = {Mareike Carina Stoll},
  title     = {Zur Rolle des Kationenkanals TRPM7 bei der Differenzierung von Muskelzellen},
  journal    = {The role of TRPM7 cation channels in the differentiation of muscle cells},
  url       = {https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:gbv:9-002693-0},
  year      = {2017},
  abstract  = {Der TRPM7-Kanal ist ubiquit{\"a}r exprimiert (Montell et al., 2005) und an multiplen physiologischen und pathologischen Prozessen beteiligt (Monteilh-Zoller et al., 2003). Durch TRPM7-Knockdown mittels siRNA wurde in dieser Arbeit versucht, die Bedeutung des Ionenkanals f{\"u}r die Differenzierungsf{\"a}higkeit von kultivierten Muskelzellen zu untersuchen. In Vorversuchen erfolgte die Etablierung der siRNA-Transfektionstechnik mit HEK293-Zellen nach zwei unterschiedlichen Protokollen. Zun{\"a}chst konnte der TRPC6-Knockdown an TRPC6 {\"u}berexprimierenden HEK293-Zellen gezeigt werden. Das Vorgehen wurde anschlie{\"s}end auf den zu untersuchenden Kanal TRPM7 in C57Bl-Zellen {\"u}bertragen. Dazu musste die Methodik wiederholt abgewandelt werden, um m{\"o}glichst viele vitale und transfizierte Zellen zu erhalten. Als Kontrollen dienten untransfizierte Zellen, mit unspezifischer siRNA-transfizierte Zellen und mit HiPerFect, dem Transfektionsreagenz, behandelte Zellen. Letztendlich konnte eine ausreichende Anzahl der transfizierten Zellen bez{\"u}glich ihrer Proliferation und Differenzierung anhand von zwei Differenzierungsmarkern, dem Ryanodinrezeptor 1 und dem SCN4A, untersucht werden. Dabei zeigten sich die folgenden Ergebnisse: Ein bis zwei Tage nach der Transfektion mit spezifischer siRNA zeigte sich eine verminderte Expression des TRPM7 in Muskelzellkulturen von ca. 50\% im Vergleich zu den Kontrollen. Die Differenzierung der siRNA-transfizierten Zellen zeigte sich mikroskopisch deutlich eingeschr{\"a}nkt. Die Hemmung der TRPM7-Expression verlangsamte die Proliferation und Differenzierung der kultivierten Muskelzellen. Die beschriebenen Auswirkungen lie{\"s}en sich aber nicht nur bei den siRNA-transfizierten Zellen, sondern teilweise auch bei Einsatz des HiPerFectes ohne zus{\"a}tzliche siRNA erkennen. Die untransfizierten Zellen differenzierten – wie erwartet – am besten. Die Differenzierung der transfizierten Zellen war nicht abh{\"a}ngig von der Menge der siRNA. Die muskelspezifischen Marker, der Ryanodinrezeptor 1 und der spannungsgesteuerte Na+-Kanal SCN4A, waren nach siRNA-Anwendung gegen den TRPM7 tendenziell vermindert. Es zeigte sich jedoch auch eine Reduktion der Differenzierungsmarker in den transfizierten Kontrollgruppen. Zusammenfassend scheint der TRPM7 f{\"u}r Zellproliferation und Differenzierung von Muskelzellen relevant zu sein. Die C57Bl-Zellen reagierten allerdings recht sensitiv auf Transfektionen, so dass diesbez{\"u}glich nur eine eingeschr{\"a}nkte Aussage getroffen werden kann. Wegen seiner ubiquit{\"a}ren Expression, seiner Beteiligung an diversen physiologischen und pathophysiologischen Prozessen und seiner bedeutenden Rolle f{\"u}r die Mg2+-Hom{\"o}ostase bleibt der TRPM7 ein h{\"o}chst interessanter und relevanter Ionenkanal.},
  language  = {de}
}