@phdthesis{Horn2012,
  author    = {Axel-Philip Christian von Horn},
  title     = {Bestimmung der H{\"a}ufigkeit und Isolierung des Granulozytenantigens HNA-3a},
  journal    = {Determination of HNA-3a Frequency and Isolation of Human Neutrophil Antigen HNA-3a},
  url       = {https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:gbv:9-001287-3},
  year      = {2012},
  abstract  = {Einf{\"u}hrung Das humane Neutrophilen-Antigen HNA-3a steht in urs{\"a}chlichem Zusammenhang mit der Entstehung transfusions- assoziierter Lungeninsuffizienz und weiteren Erkrankungen. Die Isolierung des Antigens erm{\"o}glichte eine Identifizierung und den Aufbau von routinem{\"a}{\"s}ig durchf{\"u}hrbaren Testverfahren. Zielsetzung 1. Etablieren eines Nachweisverfahrens und Screening von Blutspendern auf HNA-3a. 2. Aufreinigung der aHNA-3a-Antik{\"o}rper aus dem Plasma immunisierter Blutspender. 3. Biotinylierung des Antigens und Koppelung an verschiedene Festphasen. 4. Immunpr{\"a}zipitation. 5. Detektion mittels Gelelektrophorese und Immunoblotting. Material und Methode Mit Agglutinationstests und Durchflu{\"s}zytometrie wurde das Screening durchgef{\"u}hrt. Um das Antigen nach einer Isolierung nachweisen zu k{\"o}nnen, erfolgte eine Biotinylierung der Oberfl{\"a}chen-Proteine. Die Isolierung erfolgte mittels Immunpr{\"a}zipitation, 1-D–Gel- elektrophorese und einen Nachweis im Western-Blot mit konjugiertem Streptavidin. Ergebnisse Im Screening wurden mehrere HNA-3a-negative Spender identifiziert. Die H{\"a}ufigkeit des Antigens lag bei 98,5 \%. Die Biotinylierung beeinflusste die verwendeten Verfahren nicht bemerkbar. Bei der Immunpr{\"a}zipitation mit HNA-3a-positiven Granulozyten, die mit aHNA- 3a-Plasma inkubiert wurden, stellte sich reproduzierbar eine Bande zwischen 90 und 105 kDa dar. Diskussion Da die Ergebnisse reproduzierbar waren, konnte davon ausgegangen werden, dass es sich bei der Bande, die bei der Immunpr{\"a}zipitation mit aHNA-3a Plasma und HNA-3a positiven Lysaten spezifisch ist, um das das Epitop HNA-3a tragende Protein handelt. F{\"u}r eine Identifizierung des Antigens konnte die Bande aus dem Gel ausgeschnitten werden und mit weitergehenden Methoden charakterisiert werden. Exakt dieses Vorgehen f{\"u}hrte zu der erfolgreichen Identifizierung des Epitops HNA-3a.},
  language  = {de}
}