@phdthesis{Mischkale2011,
  author    = {Katrin Mischkale},
  title     = {Charakterisierung eines neuen infekti{\"o}sen cDNA Volll{\"a}ngenklons des Virus der Bovinen Virusdiarrhoe Typ 2 und Generierung von Virusmutanten},
  journal    = {Characterization of a new infectious full lenght cDNA clone of the bovine viral diarrhea virus type 2 and generation of virus mutants},
  url       = {https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:gbv:9-001007-0},
  year      = {2011},
  abstract  = {Im Rahmen dieser Arbeit wurde ausgehend vom nicht zytopathogenen (nzp) Wildtypvirus BVDV-2 Stamm 890 (v890WT) erstmalig ein infekti{\"o}ser cDNA Volll{\"a}ngenklon (p890FL) konstruiert. In vitro synthetisierte RNA des Volll{\"a}ngenklons p890FL replizierte nach Transfektion in bovine Zellen autonom und aus dem {\"U}berstand transfizierter Zellkulturen konnte infekti{\"o}ses Virus (v890FL) isoliert werden. Die in vitro Charakterisierung ergab ein {\"a}hnliches Wachstumsverhalten des rekombinanten Virus v890FL im Vergleich zum Wildtypvirus v890WT. Im Tierexperiment zeigte v890FL jedoch einen geringf{\"u}gig attenuierter Ph{\"a}notyp gegen{\"u}ber dem Wildtypvirus v890WT. Mit Hilfe des nzp Volll{\"a}ngenklons p890FL konnte zudem gezeigt werden, dass auch ein nzp BVDV-2 -Stamm stabil messbare Mengen an freiem NS3-Proteins bilden kann, wie es bisher nur f{\"u}r zytopathogene (zp) BVDV St{\"a}mme beschrieben worden ist. Der Volll{\"a}ngenklon p890FL diente weiterhin als Basis f{\"u}r die Etablierung zweier Deletionsmutanten, p890dNpro und p890dC, welche sich jeweils durch eine partielle Deletion des Nichtstrukturproteins Npro bzw. durch eine partielle Deletion des Kapsidproteins C auszeichnen. Die Deletion der Autoprotease Npro resultierte in einem verminderten viralen Wachstum auf Interferon-kompetenten bovinen Zellen, auf Interferon-inkompetenten Zellen k{\"o}nnen jedoch mit dem rekombinanten Virus v890FL vergleichbare Titer erreicht werden. Die Deletion des Strukturproteins C resultierte in der Bildung eines sogenannten Replikons, die in vitro synthetisierte virale RNA von p890dC war zwar in der Lage nach Transfektion in bovinen Zellen autonom zu replizieren, jedoch k{\"o}nnen keine Virusnachkommen isoliert werden. F{\"u}r die Generierung infekti{\"o}ser Virusnachkommen (sogenannter „Pseudovirionen“) wurde das Replikon p890dC unter Verwendung der Helferzelllinie WT-R2 in trans komplementiert und zu (einmal infekti{\"o}sen) Pseudovirionen verpackt. Beide Deletionsmutanten offerieren einen neuartigen Ansatz in der Etablierung von sicheren und effizienten BVDV-2 Vakzinen und stellen einen wichtigen Schritt bei der Entwicklung neuer BVDV-Impfstoffe dar. Der infekti{\"o}se cDNA Volll{\"a}ngenklon p890FL ist mit seiner 228 nt gro{\"s}en Insertion im NS2-kodierenden Bereich zudem ein wichtiges Werkzeug f{\"u}r die Untersuchung von Insertionen im NS2/3 und dem Verst{\"a}ndnis f{\"u}r die Ursachen der Zytopathogenit{\"a}t von Pestiviren.},
  language  = {de}
}