@phdthesis{Czauderna2015,
  author    = {Inga Carolin Czauderna},
  title     = {Etablierung neuer Modelle der Expressionsminderung zur funktionellen Analyse des (Pro)Reninrezeptors},
  journal    = {Establishment of new models of (pro)renin receptor downregulation for functional analyses.},
  url       = {https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:gbv:9-002207-2},
  year      = {2015},
  abstract  = {Im Rahmen der Promotionsarbeit wurden Modelle der Expressionsminderung f{\"u}r In-vitro-Studien zur Wirkung des (Pro)Renin-Rezeptors ((P)RR) etabliert und Analysen hinsichtlich m{\"o}glicher Effekte auf pH-Werte in Organellen im Vergleich zu den Effekten des spezifischen V-ATPase-Blockers Bafilomycin A durchgef{\"u}hrt. Einerseits erfolgte ein induzierter Knock-out mittels Cre/loxP-System bei embryonalen Fibroblasten der Maus (MEF), andererseits wurde als mildere Alternative eines konsequenten Knock-out eine transiente Downregulation mittels siRNA smart Pool bei Renin sezernierenden As4.1-Zellen durchgef{\"u}hrt. Anhand beider Modelle konnte nachgewiesen werden, dass sich eine Expressionsminderung des (P)RR sowie ein V-ATPase-Block mittels Bafilomycin A1 negativ auf das Zell{\"u}berleben und auf die Proliferation der Zellen auswirkte. Bei den (P)RR-Knock-out-MEF kam es zu keinen pH-Wert-Ver{\"a}nderungen, w{\"a}hrend unter der Behandlung mit Bafilomycin A1 als Ursache f{\"u}r das Zellsterben eine eindeutige pH-Wert-Erh{\"o}hung in sp{\"a}ten Endosomen und Lysosomen ausgemacht werden konnte. Sekretionsanalysen zur basalen Renin- und Proreninfreisetzung und Analysen zum jeweiligen Proteingehalt der As4.1-Zellen zeigten in den (P)RR-Knock-down-Zellen keine Ver{\"a}nderungen. Nur der spezifische Block der V-ATPasen mittels Bafilomycin A f{\"u}hrte zu einer gesteigerten Rate der basalen Reninfreisetzung. Untersuchungen saurer Organellen der As4.1-Zellen ergaben hingegen interessante Ergebnisse: W{\"a}hrend ein V-ATPase-Block erwartungsgem{\"a}{\"s} zu einer geringen Fluoreszenzintensit{\"a}t der pH-sensitiven Farbstoffe Lysosensor und Lysotracker f{\"u}hrte, nahm die Intensit{\"a}t in (P)RR-Knock-down-Zellen {\"u}berraschenderweise zu. Aus diesem gegensinnigen Effekt lie{\"s}e sich die Hypothese ableiten, der (P)RR sei ein nat{\"u}rlicher Inhibitor der V-ATPase. Die direkte Interaktion beider Proteine und die Hemmung der V-ATPase-Aktivit{\"a}t durch den (P)RR/ATP6ap2 bleiben jedoch durch funktionelle Analysen zu {\"u}berpr{\"u}fen. Die Arbeit tr{\"a}gt mit der Etablierung neuer Modelle der (P)RR-Depletion sowie mit den Daten zu pH-Werten in Organellen zur Aufkl{\"a}rung der Wirkungen des (Pro)Renin-Rezeptors bei.},
  language  = {de}
}