@phdthesis{Holstein2019,
  author    = {Sina Holstein},
  title     = {Charakterisierung der Nikotinamid-N-Methyltransferase im klarzelligen Nierenzellkarzinom},
  journal    = {Characterization of Nicotinamide-N-methyltransferase in clear cell renal cell carcinoma},
  url       = {https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:gbv:9-opus-39217},
  pages     = {222},
  year      = {2019},
  abstract  = {Das klarzellige Nierenzellkarzinom (ccRCC) ist eine von vielen Krebserkrankungen. Viele Patienten weisen eine Mutation im Von-Hippel-Lindau-Gen (VHL) auf und/ oder zeigen eine {\"U}berexpression des Enzyms Nicotinamid-N-Metyltransferase (NNMT). Es wurden insgesamt f{\"u}nf etablierte Zelllinien verwendet, die embryonale Nierenzelllinie HEK-293 und vier ccRCC-Zelllinien (Caki-1, Caki-2, 769-P, 786-O), welche sich in ihrer Expression der Proteine NNMT und VHL unterscheiden. Zudem wurde eine stabile Zelllinie aus den Caki-2 Zellen generiert, die durch ein Doxycyclin induzierbares Tet-On-System NNMT vermehrt exprimiert (C2NNMTs). Es wurden sowohl molekularbiologische als auch biochemische Methoden zur Analyse angewendet. Die Zelllinien wurden f{\"u}r Transfektionsstudien zur {\"U}berexpression oder zum Knockdown von NNMT genutzt, um die Einflussnahme auf die Enzyme Nikotinamid-phosphoribosyltransferase (NAMPT), Sirtuin 1 (SIRT1), Methioninadenosyltransferase-2 β-Untereinheit (MAT2B) und Aldehydoxidase (AOX1) zu analysieren. Da SAM (S-Adenosylmethionin) der Methyldonor von NNMT ist, wurde auch der Einfluss der Methioninkonzentration betrachtet. Viele der bisherigen publizierten Versuche wurden bei 100 µM Methionin durchgef{\"u}hrt, was jedoch nicht der humanen Serumkonzentration entspricht, welche bei 20 µM Methionin liegt. Umfangreiche massenspektrometrische Analysen f{\"u}hrten zur Identifizierung weiterer Proteine, welche durch die NNMT-Modulation beeinflusst wurden. Die Identifikation einer Vielzahl ver{\"a}nderter Targets verdeutlichte den Einfluss auf den Energiemetabolismus bis hin zur Apoptose. Es zeigten sich unterschiedliche Regulationen von Glykolyse-, Respirations-, Citratzyklus-, Pentosephosphatweg- und Lipidsyntheseproteinen. Insgesamt ergaben sich individuelle, zellspezifische Regulierungen, welche auf die Sirtuine zur{\"u}ckzuf{\"u}hren sind. Weiterhin wurden Untersuchungen zur erh{\"o}hten Expression von NNMT unter Einfluss von Nikotinamid (NAM) sowie Interleukin-6 (IL-6) durchgef{\"u}hrt. Die Analysen zeigten, dass zwischen der Pseudohypoxie und der Erh{\"o}hung der NNMT-Expression ein Zusammenhang besteht, denn IL-6 phosphoryliert ERK (engl. Extracellular-signal Regulated Kinases) und STAT3 (engl. Signal transducer and activator of transcription 3), welche beide ben{\"o}tigt werden, um die Transkription des NNMT-Gens zu beeinflussen und die NNMT-Proteinexpression zu f{\"o}rdern. Die Ergebnisse dieser Untersuchungen sollen dazu dienen, die biochemischen Zusammenh{\"a}nge einer ver{\"a}nderten Expression von NNMT besser zu verstehen und damit neue diagnostische Ans{\"a}tze zu erm{\"o}glichen.},
  language  = {de}
}