@phdthesis{Lamotte2006, author = {Dorette Lamotte}, title = {Etablierung eines Expressionsmodels f{\"u}r cKir3.4 in E.coli zur Analyse der Rolle von cKir3.4 bei der ischaemischen Praekonditionierung}, journal = {Generating a modell for recombinant expression of cKir3.4 in E.coli to analyse the role of cKir3.4 in ischemic preconditioning}, url = {https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:gbv:9-000014-6}, year = {2006}, abstract = {Die isch{\"a}mische Pr{\"a}konditionierung ist ein endogener kardioprotektiver Schutzmechanismus, vermittelt {\"u}ber kurze Phasen von Isch{\"a}mie und Reperfusion. Dieser wird unter anderem durch die {\"O}ffnung von ATP-sensitiven Kaliumkan{\"a}len der inneren Mitochondrienmembran vermittelt. In der vorliegenden Arbeit wurde die zytosolische Dom{\"a}ne (cKir3.4) der Untereinheit Kir3.4 des kardialen, ATP-sensitiven Kaliumkanals untersucht. Ausgehend von der cDNA f{\"u}r die zytosolische Dom{\"a}ne der Untereinheit Kir3.4 (cKir3.4) wurden Protokolle zur Expression als 6xHis-tag-Fusionsproteinsowie als GST-Fusionsprotein inEscherichia coli etabliert.Es zeigte sich eine Lokalisation von {\"u}ber 90\% des rekombinanten Proteins in Einschlussk{\"o}rpern, nur 10\% lagen in den l{\"o}slichen Fraktionen vor. Nach Modifikation der Aufreinigungsbedingungen und der Proteingr{\"o}{\"s}e konnte via Affinit{\"a}tschromatographie rekombinantes Protein in quantitativem Ma{\"s}stab gewonnen werden. Ferner wurde im Labor ein Pr{\"a}konditionierungsmodell f{\"u}r Rattenherzen etabliert und im anschluss f{\"u}r die Phase der Pr{\"a}konditionierung spezifische Proteine isoliert. Zudem wurde ein polyklonaler Antik{\"o}rper im Kaninchen gegen cKir3.4 generiert.}, language = {de} }