@phdthesis{Boettcher2008, author = {Sindy B{\"o}ttcher}, title = {Funktionelle Charakterisierung des essentiellen Tegumentproteins pUL36 des Pseudorabies Virus}, journal = {Functional characterization of the essential large tegument protein pUL36 of Pseudorabies Virus}, url = {https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:gbv:9-000539-8}, year = {2008}, abstract = {Das Pseudorabies Virus ist der Erreger der Aujeszkyschen Erkrankung, einer fieberhaften Allgemeinerkrankung mit neurologischen Symptomen beim Schwein. Aufgrund seiner biologischen Eigenschaften und unkomplizierten Kultivierung in Zellkultur sowie der Verf{\"u}gbarkeit eines Mausmodells hat sich PrV als geeignetes Modellsystem zur Untersuchung der alphaherpesviralen Replikation etabliert. Das Tegument stellt den komplexesten und noch am wenigsten verstandenen Teil des Herpesviruspartikels dar. F{\"u}r PrV konnten mehr als 15 dem Tegument zugeordnete Proteine identifiziert werden, die neben ihrer strukturellen Bedeutung auch regulatorische Funktionen erf{\"u}llen. Ziel der vorliegenden Arbeit war die Identifizierung und Charakterisierung funktioneller Dom{\"a}nen des essentiellen Tegumentproteins pUL36 des Pseudorabies Virus. Mit Hilfe eines Transkomplementationsassays konnten verschiedene rekombinante UL36-Proteine auf ihre F{\"a}higkeit, den letalen Replikationsdefekt einer UL36-Deletionsmutante zu komplementieren, {\"u}berpr{\"u}ft werden. Bei positiver Komplementation wurden stabile Virusrekombinanten isoliert und diese auf ein m{\"o}glicherweise ver{\"a}ndertes Replikationsverhalten in der Zellkultur (in vitro) oder im Mausmodell (in vivo) untersucht. Negative Komplementationsergebnisse weisen auf eine essentielle Funktion dieser Region innerhalb des UL36-Proteins hin. Die durchgef{\"u}hrten Prim{\"a}rsequenzvergleiche homologer UL36-Proteine zeigten einen geringen Grad an Sequenzhomologie. Jedoch konnten mehrere konservierte Dom{\"a}nen und putative Motive identifiziert werden. Dem im N-Terminus gelegenen Modul konnte die f{\"u}r HSV-1 sowie Vertretern aller drei Unterfamilien beschriebene Deubiquitinylierungsaktivit{\"a}t zugeordnet werden. Weiterhin zeigte sich, dass die 62 C-terminalen Aminos{\"a}uren innerhalb der Alphaherpesviren stark konserviert sind, was auf eine wichtige Bedeutung dieser Region f{\"u}r die Funktion des UL36-Proteins hindeutet. Eine gro{\"s}e prolinreiche Dom{\"a}ne im C-terminalen Bereich spricht f{\"u}r eine extreme Flexibilit{\"a}t des Proteins und eine m{\"o}gliche Konformations{\"a}nderung w{\"a}hrend des Replikationszykluses. Leucin-Zipper-Motive k{\"o}nnten eine pUL36-Homodimerisierung oder eine bisher noch nicht beschriebene Interaktion mit viralen oder zellul{\"a}ren Proteinen vermitteln. Nach Charakterisierung verschiedener rekombinanter UL36 Proteine l{\"a}sst sich Folgendes zum essentiellen Tegumentprotein pUL36 des Pseudorabies Virus sagen: 1) Es konnten verschiedene Dom{\"a}nen innerhalb des PrV-UL36-Proteins identifiziert werden, die f{\"u}r die Replikation sowohl in der Zellkultur als auch im Tiermodell von unterschiedlich wichtiger Bedeutung sind. Insgesamt wurden fast 50\% des Proteins deletiert, ohne einen letalen Funktionsverlust zu bewirken. 2) Der C-Terminus des UL36-Proteins des Pseudorabies Virus ist f{\"u}r die Funktion des Proteins im Replikationsgeschehen essentiell, was auf eine m{\"o}gliche Interaktion mit Kapsid- und/oder kapsidassoziierten Proteinen zur{\"u}ckzuf{\"u}hren sein k{\"o}nnte. 3) Die reifen Virionen der Mutanten zeigen keine Ver{\"a}nderungen hinsichtlich ihrer Morphologie. Auch biochemisch wurden keine Ver{\"a}nderungen in der Proteinzusammensetzung der untersuchten Virionen festgestellt. 4) Keine der charakterisierten Mutanten wies einen Defekt bei der Freisetzung neugebildeter Kapside aus dem Zellkern auf, d. h., die deletierten Bereiche haben keine Bedeutung w{\"a}hrend der nukle{\"a}ren Phasen der Virusmorphogenese. 5) PrV-pUL36 k{\"o}nnte weiterhin f{\"u}r den Ablauf der Infektion des Nervensystems von Bedeutung sein, da eine deutliche Einschr{\"a}nkung der Neuroinvasion einiger Mutanten im Mausmodell beobachtet wurde.}, language = {de} }