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Simultaner quantitativer Nachweis der AML1-ETO mRNA und einer Kontroll mRNA (PBGD) mit Hilfe der real-time PCR bei Patienten mit AML.

  • Ziel der vorliegenden Arbeit war es, eine real-time PCR für den direkten quantitativen Nachweis der t(8;21)-Translokation an mRNA, isoliert aus den Zellen des peripheren Blutes oder Knochenmarks, zu etablieren. An peripheren Blut- und Knochenmarksproben von Patienten mit t(8;21)-positiver akuter myeloischer Leukämie wurde AML1-ETO mRNA in Relation zur Kontroll-mRNA Porphobilinogen Deaminase (PBGD) quantitativ bestimmt. Die quantitative Analyse beider Gene wurden in einem einzelnen Röhrchen simultan unter Verwendung spezifischer Primer und zwei verschieden fluoreszenzmarkierter Oligonukleotidsonden, die mit unterschiedlichen Reporter-Farbstoffen gekennzeichnet waren, durchgeführt. Es wurde ermittelt, bis in welchen Grenzbereich der simultane Nachweis beider mRNA's möglich ist. Insgesamt konnten 36 periphere Blutproben von vier Patienten analysiert werden. Femer sollte ein Beitrag zu den Fragen geliefert werden, ob Patienten in Langzeitremission PCR-negative Ergebnisse aurweisen, mit welcher Empfindlichkeit diese erkannt werden können und ob sich aus diesen Untersuchungen prognostische Aussagen ergeben.
  • To monitor residual leukemic cells in patients with t(8,21)-positive acute myeloid leukemia we have established a real-time quantitative RT-PCR for the detection of AMLl-ETO mRNA in relation to the control mRNA porphobilinogen deaminase (PBGD). Simultaneous quantitative determinations of both genes in single tubes were carried out by using two different probes labeled with different reporter dyes. Peripheral blood samples from four patients were analyzed for AMLl-ETO mRNA by using real-time quantitative RT-PCR. Samples obtained from two patients in long-term remission for 3 and 6 years did not contain detectable AMLl-ETO mRNA. In one patient we were able to demonstrate, that real-time quantitative RT-PCR might detect a molecular relapse some months before clinical or cytological methods can detect recurrent disease. Minimal residual leukemic cells were also detected in one peripheral blood stem cell harvest from another patient that was used for autologous transplantation. The clinical and molecular follow-up of this patient suggests that it is not necessary in any case to remove all PCR detectable AMLl-ETO mRNA - positive cells from peripheral blood stem cell products to achieve a long-term clinical and molecular remission. These results show that real-time quantitative RT-PCR is a helpful tool for monitoring patients after primary treatment of leukemia, for determining the kinetics of disappearance and reappearance of minimal residual leukemic cells aiming at optimizing therapeutic strategies.

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Metadaten
Author: Regina Fenge
URN:urn:nbn:de:gbv:9-200342-1
Title Additional (German):keine Angaben
Title Additional (English):Simultaneous quantitative detection of AMLl-ETO mRNA and a control mRNA (PBGD) by real-time PCR to monitor patients with AML
Advisor:Prof. Dr. G. Dölken
Document Type:Doctoral Thesis
Language:German
Date of Publication (online):2006/07/19
Granting Institution:Ernst-Moritz-Arndt-Universität, Medizinische Fakultät (bis 2010)
Date of final exam:2003/11/26
Release Date:2006/07/19
GND Keyword:Blut, Knochenmark, Leukämie
Faculties:Universitätsmedizin / Klinik und Poliklinik für Innere Medizin
DDC class:600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften / 610 Medizin und Gesundheit