Robert Wolf

• Multidrug resistance protein 4 (MRP4/ABCC4) ist ein in Thrombozyten exprimierter Vertreter der ATP binding cassette (ABC)-Transporter, zu dessen physiologischen Funktionen der aktive Transport von cyclischen Nukleotiden, wie cAMP und cGMP, sowie von Eicosanoiden, wie Thromboxan A2, gehört. Obwohl bereits in MRP4-defizienten Mäusen eine reduzierte Thrombozytenaggregation experimentell nachgewiesen werden konnte, scheiterte die Aussagekraft bisheriger Arbeiten zur pharmakologischen MRP4-Inhibition an der Spezifität der eingesetzten Inhibitoren. Im Rahmen dieser Arbeit konnte mittels Transportmessungen in Membranvesikeln für den neuartigen MRP4-spezifischen Hemmstoff „Ceefourin-1“ gezeigt werden, dass der Transport sowohl von cyclischen Nukleotiden als auch des während der Thrombozytenaktivierung freigesetzten parakrinen Mediators Thromboxan A2 wirkungsvoll inhibiert wird. Daneben konnte auch der Transport des immunmodulatorischen Sphingosin-1-phosphats gehemmt werden, jedoch erst bei höheren Inhibitorkonzentrationen. Humane mit Ceefourin-1 behandelte Thrombozyten zeichneten sich in der Durchflusszytometrie durch eine reduzierte Integrin αIIbβ3-Aktivierung nach Stimulation mit niedrigen Konzentrationen von ADP und Kollagen aus. Eine Schlüsselrolle für die Vermittlung dieses Effektes konnte dabei für die cyclischen Nukleotide gezeigt werden, deren cytoplasmatische Konzentrationen durch eine Hemmung der MRP4-abhängigen Sequestrierung bzw. des Exportes gesteigert wurden. Neben direkten Effekten der cyclischen Nukleotid-abhängigen Kinasen auf die zur Integrin αIIbβ3-Aktivierung-führenden Signalkaskaden lag ein Einfluss auf die thrombozytäre Calcium-Homöostase nahe: Nach vorheriger MRP4-Inhibition gelang der Nachweis eines reduzierten Calciumeinstroms während der Thrombozyten-Aktivierung, sowohl aus intra- als auch extrazellulären Quellen, was wesentlich zur beobachteten Reduktion der Integrin-Aktivierung beitragen könnte. Interessanterweise ergaben sich neben einer erwartbaren Reduktion der Thromboxan-Freisetzung unter MRP4-Inhibition auch Hinweise auf eine verminderte Produktion des Signallipids, was ursächlich auch im veränderten thrombozytären Calciumeinstrom zu verorten ist. Unter simulierten arteriellen Scherraten wurde schließlich in einem Flusskammer-Modell nachgewiesen, dass eine temporäre MRP4-Inhibition zu einer signifikanten Reduktion der Thrombozytenadhäsion und Thrombengröße führt. Zusammenfassend stellt die therapeutische MRP4-Inhibition mit Ceefourin-1 einen vielversprechenden innovativen Ansatz zur additiven Thrombozytenaggregationshemmung, beispielsweise bei einer Thrombozyten-Hyperreaktivität, die häufig mit einer MRP4-Aufregulation einhergeht, dar.