Lidja Schwerdtner

• Kollagenosen umfassen eine heterogene Gruppe komplexer, chronischer und lebensbedrohlicher Autoimmunerkrankungen unbekannter Ätiologie, die zu multiplen Organpathologien wie einer Nierenbeteiligung führen können. Dabei wird deren antinukleäre Autoantikörperproduktion insbesondere mit den NA-TLRs TLR7 und TLR9 assoziiert, aus der eine erhöhte IFN-α Produktion resultiert. Tierexperimentelle Versuche zeigen, dass die Rolle von TLR7 in der SLE-Pathogenese verstärkt wird, wenn die regulatorische Rolle von TLR9 fehlt. In dieser Arbeit wurde in einem translationalem Ansatz eine kleine Kollagenosekohorte (n = 14) auf TLR7 und/oder TLR9 Pathwaydefekte anhand einer differenziell veränderten Zytokinantwort untersucht. In diesem Zuge wurde ein Antikörper-Panel etabliert, welches erlaubt pDCs durchflusszytometrisch exakt zu detektieren und gleichzeitig deren intrazelluläre Zytokinproduktion (IFN-α, TNF-α) nach dosisabhängiger Stimulation mit TLR7 und TLR9 Agonisten auf Einzelzellebene zu messen. Nach TLR9 Stimulation konnte eine signifikante Reduktion des prozentualen Anteils der IFN-α+ produzierenden pDC im Vergleich zur gesunden Kohorte festgestellt werden. Gleichzeitig war die Fähigkeit der pDCs auf Einzelzellebene IFN-α zu produzieren nach TLR9 Stimulation signifikant gesteigert. Dieses Ergebnis führte erstmalig zur Neubewertung des Begriffes „IFN-α produzierenden Kapazität“, in der neben den prozentualen Anteil der IFN-α+ pDCs auch der MFI der IFN-α+ pDCs, als semiquantitatives Maß für die (intrazelluläre) Zytokinexpression pro Zelle, mitbewertet wird. Hinsichtlich der TNF-α produzierenden Kapazität der pDCs ergaben sich nach TLR7 bzw. TLR9 Stimulation keine signifikanten Änderungen. Außerdem ließen sich anhand der erhobenen Daten die pDCs definiert nach ihrer TNF-α und IFN-α Produktion in vier funktionelle Subgruppen unterteilen: die „non producer“ IFN-α-TNF-α-, die einfachpositiven IFN-α+TNF-α- und IFN-α-TNF-α+ und die doppelpositiven IFN-α+TNF-α+. Hierbei zeigte sich die Subgruppe der einfachpositiven IFN-α+TNF-α- pDCs der Kollagenosepatienten nach TLR9 Stimulation im Vergleich zur gesunden Kohorte signifikant reduziert. Bei individueller Betrachtung der dosisabhängigen TLR7 bzw. TLR9 Antwort konnten keine größeren TLR7 und TLR9 Pathwaydefekte bei den Patienten festgestellt werden. Des Weiteren war keine Korrelation zwischen dem Anti-dsDNA Antikörpertiter der Patienten und der TLR7 bzw. TLR9 vermittelte Häufigkeit der IFN-α+ pDCs festzustellen. Zusammenfassend konnte in dieser Arbeit eine Methode zur durchflusszytometrisch Untersuchung von pDCs und deren intrazelluläre Zytokinproduktion (IFN-α, TNF-α) auf Einzelzellebene etabliert werden. Es wurde erstmalig bei der Bewertung der IFN-α bzw. TNF-α produzierenden Kapazität der pDCs neben dem prozentual positiven Anteil auch der Aspekt der mittleren Zytokinproduktion auf Einzelzellebene (mit Hilfe des MFI) mitberücksichtigt. Hinzu erfolgte eine Einteilung der pDCs definiert nach ihrer TNF-α und IFN-α Produktion in vier funktionelle Subgruppen. An einer größeren Kollagenosepatientenkohorte sollte eine Fortsetzung der Untersuchungen, die auf die in der vorgelegten Arbeit etablierten Methode aufbauen, erfolgen. Dadurch können einzelne Patienten mit TLR7 und/oder TLR9 Pathwaydefekte identifiziert werden, bei der man mit Hilfe genetischer Testungen mögliche aberrante Transkripte oder Pathwaydefekte aufdecken könnte. Dies diene langfristig zur Entwicklung individualisierter Therapieansätze für eine zielgerichtete Therapie gegen Kollagenosen beizutragen.