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Die ischämische Präkonditionierung ist ein endogener kardioprotektiver Schutzmechanismus, vermittelt über kurze Phasen von Ischämie und Reperfusion. Dieser wird unter anderem durch die Öffnung von ATP-sensitiven Kaliumkanälen der inneren Mitochondrienmembran vermittelt. In der vorliegenden Arbeit wurde die zytosolische Domäne (cKir3.4) der Untereinheit Kir3.4 des kardialen, ATP-sensitiven Kaliumkanals untersucht. Ausgehend von der cDNA für die zytosolische Domäne der Untereinheit Kir3.4 (cKir3.4) wurden Protokolle zur Expression als 6xHis-tag-Fusionsproteinsowie als GST-Fusionsprotein inEscherichia coli etabliert.Es zeigte sich eine Lokalisation von über 90% des rekombinanten Proteins in Einschlusskörpern, nur 10% lagen in den löslichen Fraktionen vor. Nach Modifikation der Aufreinigungsbedingungen und der Proteingröße konnte via Affinitätschromatographie rekombinantes Protein in quantitativem Maßstab gewonnen werden. Ferner wurde im Labor ein Präkonditionierungsmodell für Rattenherzen etabliert und im anschluss für die Phase der Präkonditionierung spezifische Proteine isoliert. Zudem wurde ein polyklonaler Antikörper im Kaninchen gegen cKir3.4 generiert.
Charakterisierung plasmamembrangebundener Proteasen von Nicotiana tabacum und Hordeum vulgare
(2012)
Es wurden erstmals zwei plasmamembrangebundene Proteaseformen in den Wurzeln der Gerste massenspektrometrisch identifiziert und den Metalloaminopeptidasen der Peptidasefamilien M17 und M24 zugeordnet. Ausgehend von Enzymaktivitätstests mit verschiedenen Substraten und gelelektrophoretischer Fraktionierungen existieren darüber hinaus weitere PM-Proteasen des Aminopeptidase-, Carboxypeptidase- und Endoproteasetyps an der pflanzlichen Plasmamembran (PM). Die untersuchten PM-Proteasen stellen Triton X-114-resistente Proteine dar, die erfolgreich mit Octylglucosid solubilisiert wurden und sowohl an der inneren als auch an der apoplastischen Seite der PM lokalisiert sein könnten. Durch endogene Proteolyse werden andere PM-Proteine wie Aquaporine und P-Typ-H+-ATPasen durch die PM-Proteasen reguliert. Dabei zeigen einige dieser Proteolyseprodukte Proteaseaktivität, die für vier Proteaseformen der Gerste erst nach der Abtrennung von der PM nachweisbar war.