Die Dissertation beschreibt umfassende Untersuchungen zu den hĂ€ufig miteinander assoziierten Tetraspaninen CD9, CD81 und CD151 an einer permanenten murinen Podozytenzelllinie. Sie gibt Aufschluss ĂŒber die Bedeutung der Tetraspanine, insbesondere von CD151 in Podozyten. PodozytĂ€re VerĂ€nderungen stehen hĂ€ufig im Zusammenhang mit schweren glomerulĂ€ren Defekten und bilden damit eine Ursache fĂŒr renale Erkrankungen. Mit dieser Arbeit wurde erstmals gezeigt, dass die Tetraspanine CD9, CD81 und CD151 einen maĂgeblichen Einfluss auf die Morphologie und die AdhĂ€renz von kultivierten Podozyten ausĂŒben. Dabei trĂ€gt vor allem die Einflussnahme der Tetraspanine auf die Zellfortsatzbildung sowie auf die Expression von ÎČ1-Integrin zu einem besseren VerstĂ€ndnis ihrer Rolle in Podozyten bei.
In der durchgefĂŒhrten Studie untersuchten wir die Wertigkeit der endosonographisch gestĂŒtzten Feinnadelaspiration unter der Fragestellung eines Malignoms bei suspekten LĂ€sionen im Pankreas. In einem Zeitraum von 2.5 Jahren wurden bei 204 Patienten 232 endosonographische Punktionen unter Fragestellung einer Pankreasneoplasie durchgefĂŒhrt. Die in dieser Arbeit gezeigten Ergebnisse bestĂ€tigen die endosonographisch gestĂŒtzte Feinnadelpunktion als hilfreiches diagnostisches Verfahren in der AbklĂ€rung suspekter LĂ€sionen im Pankreas als sehr spezifisches Verfahren. Im Vergleich eines Histopathologen mit einem ausgewiesenen Zytopathologen ergaben die Untersuchungen keinen signifikanten Unterschied im Befundergebnis. Dieses deutet darauf hin, dass bezĂŒglich des zu erhebenden Befundes mehr die QualitĂ€t des gewonnenen Probenmaterials als die besondere Expertise des Befunders maĂgeblich das Ergebnis einer sicheren und korrekten Diagnose bestimmt. Des Weiteren zeigen die Ergebnisse, dass durch eine Umstellung der Probenfixierung von Luft auf Formalin, das Befundergebnis nicht negativ beeinflusst wird. Mehr noch ergab sich bei einer Formalinfixierung eine geringgradig jedoch nicht signifikant gesteigerte Befundausbeute. So kann bei der endosonographisch gestĂŒtzten Feinnadelaspiration die Formalinfixierung genutzt werden, ohne dass hierdurch eine Reduzierung der Befundausbeute eintritt. Die Umstellung der Probenfixierung hin zur Formalin-fixierten Zelle bedeutet fĂŒr den Allgemeinpathologen keine relevante BeeintrĂ€chtigung der Befunderstellung. Hingegen wird die Prozedur der Feinnadelpunktion im Handling, zeitlichen Ablauf und Kostenblock durch Wegfall eines Onsite-Zytopathologen vereinfacht und verkĂŒrzt
Die vorliegende Arbeit befasst sich damit, ob und wenn ja in welcher Konzentration, die bekannten lytischen Proteine aus E. fetida zytolytisch auf humane Tumorzellen wirken (IGR-1, Caki-1 und 2, RCC-EW, Du-145). Es wurden reine CoelomflĂŒssigkeit (CF), Coelomozytenlysat und mittels PAGE isolierte HĂ€molysine eingesetzt, um den zytotoxischen Effekt auf die Zelllinien zu untersuchen. Weiterhin sollte untersucht werden, ob CF und die isolierten Proteine in der Lage sind, in den Tumorzellen Apoptose auszulösen. Als Positivkontrolle fĂŒr Apoptoseinduktion und zytomorphologische Vergleichsstudien wurde Camptothecin eingesetzt. Hierbei kamen die Verfahren des MTT-Testes, des Trypanblautestes, das Annexin V Fluos Staining Kit, sowie der PARP Western Blot und die RT-MPCR unter Verwendung der âhuman Apoptose Sets 5 und 7â zum Einsatz. Zur Isolation der Proteine wurde die Polyacrylamidgelelektrophorese verwand. In den Untersuchungen konnte ein eindeutiger zytotoxischer Effekt der Testsubstanzen gezeigt werden. Lichtmikroskopische Untersuchungen deuteten auf Apoptoseinduktion hin, die durch Ergebnisses des Annexin V Tests bestĂ€tigt wurden. PARP Western Blot und die RT-MPCR erbrachten keine weiteren Resultate. Durch die PAGE wurde ein neues hĂ€molytisches Protein isoliert, welches als new Protein bezeichnet wurde.
Podozyten, die hochspezialisierten viszeralen Epithelzellen des Glomerulus, bedecken die AuĂenseite der glomerulĂ€ren Kapillaren und sind fĂŒr die Filtration des Blutes in der Niere essentiell. Eine SchĂ€digung der Podozyten geht mit dem Verlust ihrer komplexen dreidimensionalen Struktur, dem sogenannten FuĂfortsatz-Effacement einher. Effacement und Detachment, das Ablösen der Podozyten von der glomerulĂ€ren Basalmembran, fĂŒhren zur Ausscheidung von hochmolekularen Proteinen mit dem Urin und in vielen FĂ€llen zu einer nicht heilbaren chronischen Nierenerkrankung (CKD). In der Vergangenheit wurde anhand von Zellkulturstudien und Versuchen an Ratten und MĂ€usen die These aufgestellt, dass Podozyten entlang der glomerulĂ€ren Basalmembran wandern können. Da diese Experimente jedoch bisher nicht eindeutig belegen konnten, dass es sich bei den beobachteten Zellen tatsĂ€chlich um vollstĂ€ndig differenzierte Podozyten handelte und diese Fragestellung fĂŒr das VerstĂ€ndnis der Pathogenese chronischer Nierenerkrankungen und damit fĂŒr die Entwicklung neuer Therapieverfahren von wesentlicher Bedeutung ist, wurde im Rahmen dieser Arbeit ein Verfahren entwickelt, Fluoreszenz-markierte Podozyten in vivo in lebenden Zebrafischlarven zu beobachten. Dazu wurde zunĂ€chst durch Kreuzung ein transgener Zebrafischstamm generiert, dessen Larven vollstĂ€ndig transparent sind und das grĂŒn-fluoreszierende Protein unter Kontrolle des wt1a-Promoters in Podozyten exprimieren. Mit der 2-Photonenmikroskopie konnten nun in Langzeitaufnahmen einzelne Podozyten in fĂŒnf bis sechs Tage alten Zebrafischlarven beobachtet werden. Hierbei zeigte sich eindeutig, dass Podozyten ĂŒber ZeitrĂ€ume von bis zu 23 Stunden nicht wandern. Da mit dieser Technik auch einzelne PrimĂ€rfortsĂ€tze der Podozyten beobachtet werden können, konnte erstmals gezeigt werden, dass sich auch diese nicht signifikant innerhalb eines Beobachtungszeitraums von bis zu 23 Stunden bewegten. Als Nachweis, dass mit dieser Beobachtungsmethode dynamische Podozyten nachgewiesen werden können, wurde die Bewegung einzelner Zellen wĂ€hrend der Bildung des Glomerulus ĂŒber einen Zeitraum von 3 Tagen verfolgt. Um ferner auszuschlieĂen, dass PodozytenfortsĂ€tze sehr schnelle, oszillierende Bewegungen vollfĂŒhren, wurden einzelne Podozyten in sehr kurzen Intervallen aufgenommen und das Bewegungsmuster analysiert. Auch hier zeigten sich keine dynamischen Eigenschaften der Podozyten im lebenden Organismus. Somit kann davon ausgegangen werden, dass Podozyten unter physiologischen Bedingungen in lebenden Zebrafischlarven kein dynamisches Verhalten zeigen, sondern als statische Zellen anzusehen sind.